原代細胞培養(yǎng)基的凍存與復蘇技術(shù)工藝

更新時間：2021-07-22

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　　原代細胞培養(yǎng)基用于人臍帶間充質(zhì)干細胞分離培養(yǎng)方法的研究。是培養(yǎng)原代細胞中供給細胞營養(yǎng)和促使細胞生殖增殖的基礎物質(zhì)，也是培養(yǎng)原代細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。細胞培養(yǎng)基是人工模擬動物細胞的體內(nèi)生長環(huán)境，維持體外細胞存活和增殖的營養(yǎng)物質(zhì)基礎，其主要功能是為細胞提供適宜的pH和滲透壓，以及細胞本身不能合成的各種營養(yǎng)物質(zhì)。

　　原代細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細胞凍存在-196℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融。

　　原代細胞培養(yǎng)基凍存

　　1、選用生長情況好，數(shù)量較多的原代細胞，凍存前一天換液一次。

　　2、貼壁細胞需用0.25％胰酶常規(guī)消化將細胞消化下來，將細胞懸液收集至離心管中。

　　3、1000rpm離心5分鐘，棄上清液。

　　4、沉淀加含DMSO的培養(yǎng)液，計數(shù)，調(diào)整至（1-10）×106/ml。

　　5、將懸液分至凍存管中，每管1ml。

　　6、密封凍存管，封口一定要嚴，否則復蘇時易出現(xiàn)爆裂。

　　7、用記號筆標明細胞種類，凍存日期。

　　8、按下列順序降溫：室溫→4℃（20分鐘〕→冰箱冷凍室（30分鐘）→超低溫冰箱（—80℃過夜）→液氮。

　　原代細胞培養(yǎng)基復蘇

　　1、取出細胞，迅速放入37℃溫水中快速解凍。